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    1. 新聞中心

        使用Nanophotometer?進行核酸定量的良好操作實踐

        核酸定量是包括qPCR,NGS在內的部分生命科學實驗流程的重要步驟, Nanophotometer?作為核酸定量的常用儀器,可選擇測量所有類型的核酸,包括雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA、miRNA和寡核苷酸,還可選擇輸入miRNA和寡核苷酸序列作為自定義消光系數的測量方法。以及測量熒光標記的核酸及染料的吸光值,例如作為微陣列工作流程中的質量控制步驟,染料濃度和標記率將自動計算和顯示。

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        為了獲得準確性和一致性好的測量數據,我們建議用戶采取以下良好操作實踐:

        1,確認所測量的核酸樣品種類,選擇正確對應的樣品類型和消光系數。

        2,使用無塵紙清潔樣品臺(底部窗口和頂部反射鏡),不建議使用擦鏡紙,多數的擦鏡紙吸水性較差。請正確擦拭樣品臺和反射鏡,而非將無塵紙墊在樣品臺上,這樣往往會導致樣品殘留。

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        3,如果底座有樣品殘留或污染,在底座上滴5μl純水,并關閉上蓋浸泡一段時間,期間可點擊空白測量(光程的快速切換可起到沖洗作用)然后徹底擦拭底座和反射鏡。

        4,空白溶液應與與用于洗脫/溶解樣品的緩沖液相同,如常用的10 mM Tris-HCl緩沖液。

        5,對于低濃度的樣品,建議使用低吸附的樣品管和吸頭,將測量準確性和重復性。移取樣品前,可使用樣品潤洗吸頭2-3次,再行移取樣品。

        6,為了確定空白溶液的質量,可執行回測操作,以空白溶液作為樣品進行測量,通??山邮艿臉藴蕿槲庵怠堋?.05。

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        7,使用內置渦旋混勻器或適當拍打樣品管,使樣品均一化,這是準確測量的前提。

        8,使用底座的LED燈確認樣品位置正確,也可用于氣泡觀察。

        9,如果使用含有洗滌劑(如吐溫或Triton)的緩沖液,建議啟用“氣泡識別”功能

        10,如果樣品濃度<10 ng/μl,則可重復測量取用平均值,減小相對誤差的影響。

        11,檢查260/230、260/280比率和污染物的完整光譜圖數據。Sample Control功能將對有問題的樣品進行標記,點擊標記可獲得詳細信息。

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        12,當測量高濃度樣品后,或者當一個樣品測量結束后,請清潔樣品臺。

        13,測量結束后,請勿在樣品臺和上蓋之間墊紙,設備樣品臺為封閉式,本身具備防塵設計。

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        測量過程中的重要提示:

        提示內容:氣泡,細屑殘留或樣品質量差。請重新添加樣品。

        原因及處理:氣泡識別功能打開時,如檢測到氣泡、紙屑等殘留物或不適宜的樣本,如混濁樣本,將顯示該信息。請檢查樣品,徹底清潔底座樣品窗和上蓋反射鏡,并重新滴加樣品。為避免氣泡,建議通過反向移液進行取樣。氣泡識別關閉時,所顯示該信息將不包含氣泡。

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        提示內容:在{250 - 280 nm,

        280 - 340 nm, 340 - 400 nm,

        400 - 475 nm, 475 - 550 nm,

        550 - 625 nm, 625 - 700 nm }處有高吸光度值。差的空白或樣品臺需要清

        原因及處理:當空白測量檢測到對應波長段區域的較高吸光值時,將顯示該信息。警告信息顯示吸光度出現的波長范圍。在空白測量中,兩個因素可能會導致高吸光度:空白溶液/緩沖液在該波長范圍內具有吸光值,或樣品窗口、反射鏡沒有被完全的清潔。請將基座上的樣品窗和反射鏡徹底清洗,并檢查空白溶液的吸光度(用空白的水、空白緩沖液作為樣品)。

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        提示內容:在指定波長處達到最大吸光度水平。計算可能導致低/錯誤的結果。

        原因及處理:所用樣品的濃度過高,超過規定的吸光度范圍。微量體積的最大吸光度為330 A(10 mm路徑),比色皿測量的最大吸光度為2.65 A。請適當稀釋樣品并再次測量。


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